電泳轉移緩沖液的作用,你了解多少?
更新時(shí)間:2022-02-21 點(diǎn)擊次數:1256次
在生化實(shí)驗時(shí)做DNA或蛋白質(zhì)電泳時(shí),都會(huì )用到緩沖劑,電流通過(guò)水(H2O)時(shí),在陽(yáng)極發(fā)生氧化反應,生成氧氣以及氫離子;在陰極發(fā)生還原反應,生成氫氣以及氫氧根離子。長(cháng)時(shí)間電泳將會(huì )使陽(yáng)極變酸,陰極變堿。一個(gè)好的緩沖系統應該有較強的緩沖能力,使溶液兩極的pH保持基本穩定。
電泳轉移緩沖液在電泳過(guò)程中的一個(gè)作用是維持溶液的pH穩定。電流通過(guò)水(H2O)時(shí),在陽(yáng)極發(fā)生氧化反應,生成氧氣以及氫離子;在陰極發(fā)生還原反應,生成氫氣以及氫氧根離子。長(cháng)時(shí)間電泳將會(huì )使陽(yáng)極變酸,陰極變堿。一個(gè)好的緩沖系統應該有較強的緩沖能力,使溶液兩極的pH保持基本穩定。電泳緩沖液的另一個(gè)作用是使溶液帶有一定的導電性,以利于DNA分子的遷移。DNA為堿性物質(zhì),在電泳時(shí)帶負電荷,由負極向正極遷移。
電泳轉移緩沖液還有一個(gè)組分是EDTA,目的是螯合Mg2+等離子,防止電泳時(shí)激活DNA酶。由于核酸酶需要這些離子,EDTA可以將這些離子牢牢抓住,避免核酸降解。但要注意的是,鎂離子同時(shí)是很多酵素的輔助因子,如限制酶、DNA聚合酶等等,因此EDTA的濃度一般不會(huì )太高。
電泳轉移緩沖液電泳時(shí)正極與負極都會(huì )發(fā)生電解反應,正極發(fā)生的是氧化反應,負極發(fā)生的是還原反應,長(cháng)時(shí)間的電泳將使正極變酸,負極變堿。一個(gè)好的緩沖系統應有較強的緩沖能力,是溶液兩極的pH保持基本不變。電泳緩沖液的另一個(gè)作用是使溶液具有一定的導電性,以利于DNA分子的遷移。